第22卷 第4期 安 徽 中 医 学 院 学 报 V ol 22 N o 4 2003年8月 JO U RNA L OF AN HU I T CM CO LLEGE Aug 2003
比色法测定人参中人参总皂苷的含量
桂双英, 周亚球
(安徽中医学院药学系, 安徽合肥 230038)
摘要:目的:建立人参中人参总皂苷的含量测定方法。方法:采用比色法测定。结果:比色法测定的线性范围为15. 0~75. 0μg , 相关系数r =0. 9997; 平均回收率为100. 61%,RSD 为1. 51%(n =6) 。结论:本法简便、准确、灵敏度高、重复性好, 可用于人参药材及含人参制剂的含量测定。
关键词:人参; 人参皂苷Re ; 人参总皂苷; 大孔吸附树脂; 比色法; 含量测定 中图分类号:R927. 2 文献标识码:A 文章编号:1000-2219(2003) 04-0051-02 人参为五加科植物人参(Panax Ginseng C . A . M ey ) 的干燥根, 具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功效。据报道, 人参中含皂苷、多糖、挥发油、微量元素等多种成分。其中人参皂苷是其主要的活性成分, 目前已知的人参皂苷已超过30种, 如Ra 1、Ra 2、Ra 3、Rb 1、Rb 2、Rb 3、Rc 、Rd 、Rg 1、Rg 2、Rg 3、Re 、Rh 、Rf 等[1]。人参皂苷的分析方法较多, 如分光光度法、比色法、薄层扫描法、气相色谱(GC ) 法、HPLC 法等。本课题采用大孔吸附树脂分离纯化人参总皂苷, 以人参皂苷Re 为对照, 采用比色法检测人参中人参总皂苷的含量。
1 仪器与试药
6010型紫外分光光度计, 安捷伦科技上海分析仪器有限公司; 大孔吸附树脂柱(内径1. 5cm , 长30cm ) , 中国科学技术大学玻璃仪器厂; AB104-N 型电子分析天平, 梅特勒托利多仪器有限公司(上海) ; 硅胶高效薄层板(5cm ×10cm ) , 山东省烟台市化学研究所; 人参药材均购自安徽省亳州市药材市场, 人参产地为吉林省, 由本系中药鉴定教研室潘鲁敏副教
作者简介:桂双英(1969-) , 女, 博士研究生, 讲师。
授鉴定; 人参皂苷Re 对照品由中国药品生物制品检验所提供; D 101型大孔吸附树脂, 天津骨胶厂; 其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Re 5. 0mg , 加甲醇溶解定容至10ml , 制成每毫升含Re 0. 5mg 的溶液。2. 2 供试品溶液的制备 取人参粉末(过65目筛) 1g , 精密称定, 置索氏提取器中, 加氯仿40ml , 加热回流3h , 弃去氯仿液, 药渣挥去氯仿, 连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中, 精密加入水饱和的正丁醇50ml , 密塞, 放置过夜, 超声处理(功率250W , 频率50kHz ) 30min , 滤过, 精密量取25ml , 蒸干, 残渣加水10ml , 微热使溶解, 放冷, 上已处理好的D 101大孔吸附树脂柱(树脂高度为12cm ) , 以水50ml 洗脱, 弃去水液, 再用700m l /L 乙醇50ml 洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 用甲醇溶解并转移至5ml 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 即得。2. 3 精密吸取对照品溶液90μl 和供试品溶液20μl , 分别加入干燥的具塞试管中, 水浴挥干溶剂, 加入新鲜配制的50ml /L 香草醛-冰
京:化学工业出版社, 1994. 242~247.
[2]Richard T , W L Hunter . Solid -state characterization of paclitaxel [J ]. Pharmaceutical Sciences , 1997, 86(12) :1458~1462.
[3]Khattab F I . T her mal analysis o f pharmaceutical com -pounds Ⅴ:The use of differential scanning calorimetry in the analy sis of certain pharmaceuticals [J ]. T hermochem A cta , 1983, 61:253~268.
(收稿日期:2003-04-21)
的活化能愈高, 它发生降解反应所需的能量也就愈大, 即愈不易降解, 药物愈稳定。根据差热分析法对Tax 药物稳定性的测定, 热降解反应开始温度为
263℃(在10℃/min 升温速率下) , 热降解活化能E 为117. 1kJ /mol , 频率因子A 为5. 714×1010, 各温度T 与速率常数K 的相互关系表达式为:K =5. 714×1010e
参考文献:
[1]刘振海. 分析化学手册·第六分册(热分析) [M ]. 北
-14085/T
。
醋酸溶液0. 2m l , 高氯酸0. 8ml , 于60℃恒温水浴中加热15min , 取出, 流水冷却2min , 加冰醋酸5ml , 摇匀, 随行试剂为空白, 于6010型紫外分光光度计上, 在400~700nm 波长范围内进行扫描。结果供试品溶液与对照品溶液均在552nm 波长处有最大吸收, 故确定测定波长为552nm [2]。
2. 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液30, 60, 90, 120, 150μl , 分别加入5支干燥具塞试管中, 水浴挥干溶剂, 各加入新鲜配制的50ml /L 香草醛-冰醋酸溶液0. 2m l 、高氯酸0. 8ml , 于60℃恒温水浴中加热15min , 取出, 流水冷却2min , 加冰醋酸5ml , 摇匀, 随行试剂空白, 按照分光光度法试验, 在552nm 波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标, 人参皂苷Re 含量为横坐标, 绘制标准曲线, 线性方程为:y =0. 0573x -0. 0141, r =0. 9997。结果表明:人参皂苷Re 在15. 0~75. 0μg 范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液60μl , 5份, 依法显色后测定吸收度, 结果RSD 为1. 16%,说明精密度良好。
2. 6 样品溶液稳定性和显色后溶液稳定性试验 取样品溶液放置, 分别在0, 1, 2, 3, 4h 取样20μl , 按照线性实验方法显色后测定吸收度, 计算样品含量, 结果4h 内很稳定, RSD 为2. 01%。取样品溶液20μl , 依法显色后放置, 分别在0, 1, 2, 3h 测定吸收度, 计算样品含量, 结果3h 内较稳定, RSD 为2. 39%。
2. 7 重复性试验 依法对同一样品进行6次独立测定吸收度, 结果平均含量为3. 76%,RSD 为1. 87%。
2. 8 加样回收率试验 精密称取已知含量的人参粉末(过65目筛) 1g , 6份, 加入人参皂苷Re 对照品适量, 按照供试品溶液制备方法制备样品液, 各取10μl 样品液, 依法显色后测定吸收度, 计算回收率,
结果见表1。
表1 加样回收率
试验号1
23456
样品量加样量测得量回收率平均RSD (mg ) (mg ) (mg ) (%) 回收率(%)
3. 713. 797. 59102. 373. 783. 815. 5799. 483. 803. 833. 853. 79
3. 84
3. 823. 833. 85
7. 63
7. 607. 767. 69
99. 74
98. 69102. 09101. 30
100. 61 1. 51
2. 9 样品含量测定 精密称取人参粉末(过65目筛) 1g , 按供试品溶液制备方法制备样品溶液, 按线性实验方法显色后测定吸收度, 计算含量, 结果见表
2。
表2 样品含量
试验号123
人参皂苷(mg /g ) 37. 9139. 0338. 20
RSD
(%) 1. 350. 981. 20
3 讨论
采用大孔吸附树脂分离纯化人参有效部位———人参总皂苷, 然后用比色法测定人参总皂苷, 可
以消除杂质干扰。该方法精密度高, 重现性、稳定性均较好, 平均回收率为100. 61%,可以用于人参药材及含人参制剂的质量控制。
参考文献:
[1]郑虎占, 董泽宏, 佘靖. 中药现代化研究与应用[M ]. 北京:学苑出版社, 1997. 43~44.
[2]中华人民共和国卫生部药典委员会. 药品标准(中药成方制剂) (第18册) [S ]. 1998. 167~168.
[3]蔡雄, 刘中秋, 王培训, 等. 大孔吸附树脂富集纯化人参皂苷工艺[J ]. 中成药, 2001, 23(9) :631~634.
(收稿日期:2003-03-31)
[3]
Determination of Ginsenosides in Panax Ginseng by Colorimetric Method
GUI Shuang -ying , ZHOU Y a -qiu
(Anhui College of Traditional Chinese Medicine , Anhui Hefei 230038, China )
A bstract :Objective :To establish a method of determination of ginsenosides in Panax Ginseng . M ethod :
Colo rimetric method analysis was employed . Result :The method w as linear at the range of 15. 0~75. 0μg , r =0. 9997; and the average recovery was 100. 61%,RSD was 1. 51%(n =6) . Conclusion :The method is simple , accurate , hig hly sensitive and reproducible . It m ay be used for the quantitative determination of ginsenosides in Panax Ginseng and its preparations .
Key words :Panax Ginseng ; Ginsenoside Re ; Ginsenosides ; Macropo rous resin ; Colo rimetric method ; Content determination
第22卷 第4期 安 徽 中 医 学 院 学 报 V ol 22 N o 4 2003年8月 JO U RNA L OF AN HU I T CM CO LLEGE Aug 2003
比色法测定人参中人参总皂苷的含量
桂双英, 周亚球
(安徽中医学院药学系, 安徽合肥 230038)
摘要:目的:建立人参中人参总皂苷的含量测定方法。方法:采用比色法测定。结果:比色法测定的线性范围为15. 0~75. 0μg , 相关系数r =0. 9997; 平均回收率为100. 61%,RSD 为1. 51%(n =6) 。结论:本法简便、准确、灵敏度高、重复性好, 可用于人参药材及含人参制剂的含量测定。
关键词:人参; 人参皂苷Re ; 人参总皂苷; 大孔吸附树脂; 比色法; 含量测定 中图分类号:R927. 2 文献标识码:A 文章编号:1000-2219(2003) 04-0051-02 人参为五加科植物人参(Panax Ginseng C . A . M ey ) 的干燥根, 具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功效。据报道, 人参中含皂苷、多糖、挥发油、微量元素等多种成分。其中人参皂苷是其主要的活性成分, 目前已知的人参皂苷已超过30种, 如Ra 1、Ra 2、Ra 3、Rb 1、Rb 2、Rb 3、Rc 、Rd 、Rg 1、Rg 2、Rg 3、Re 、Rh 、Rf 等[1]。人参皂苷的分析方法较多, 如分光光度法、比色法、薄层扫描法、气相色谱(GC ) 法、HPLC 法等。本课题采用大孔吸附树脂分离纯化人参总皂苷, 以人参皂苷Re 为对照, 采用比色法检测人参中人参总皂苷的含量。
1 仪器与试药
6010型紫外分光光度计, 安捷伦科技上海分析仪器有限公司; 大孔吸附树脂柱(内径1. 5cm , 长30cm ) , 中国科学技术大学玻璃仪器厂; AB104-N 型电子分析天平, 梅特勒托利多仪器有限公司(上海) ; 硅胶高效薄层板(5cm ×10cm ) , 山东省烟台市化学研究所; 人参药材均购自安徽省亳州市药材市场, 人参产地为吉林省, 由本系中药鉴定教研室潘鲁敏副教
作者简介:桂双英(1969-) , 女, 博士研究生, 讲师。
授鉴定; 人参皂苷Re 对照品由中国药品生物制品检验所提供; D 101型大孔吸附树脂, 天津骨胶厂; 其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的人参皂苷Re 5. 0mg , 加甲醇溶解定容至10ml , 制成每毫升含Re 0. 5mg 的溶液。2. 2 供试品溶液的制备 取人参粉末(过65目筛) 1g , 精密称定, 置索氏提取器中, 加氯仿40ml , 加热回流3h , 弃去氯仿液, 药渣挥去氯仿, 连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中, 精密加入水饱和的正丁醇50ml , 密塞, 放置过夜, 超声处理(功率250W , 频率50kHz ) 30min , 滤过, 精密量取25ml , 蒸干, 残渣加水10ml , 微热使溶解, 放冷, 上已处理好的D 101大孔吸附树脂柱(树脂高度为12cm ) , 以水50ml 洗脱, 弃去水液, 再用700m l /L 乙醇50ml 洗脱, 收集洗脱液, 蒸干, 用甲醇溶解并转移至5ml 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀, 即得。2. 3 精密吸取对照品溶液90μl 和供试品溶液20μl , 分别加入干燥的具塞试管中, 水浴挥干溶剂, 加入新鲜配制的50ml /L 香草醛-冰
京:化学工业出版社, 1994. 242~247.
[2]Richard T , W L Hunter . Solid -state characterization of paclitaxel [J ]. Pharmaceutical Sciences , 1997, 86(12) :1458~1462.
[3]Khattab F I . T her mal analysis o f pharmaceutical com -pounds Ⅴ:The use of differential scanning calorimetry in the analy sis of certain pharmaceuticals [J ]. T hermochem A cta , 1983, 61:253~268.
(收稿日期:2003-04-21)
的活化能愈高, 它发生降解反应所需的能量也就愈大, 即愈不易降解, 药物愈稳定。根据差热分析法对Tax 药物稳定性的测定, 热降解反应开始温度为
263℃(在10℃/min 升温速率下) , 热降解活化能E 为117. 1kJ /mol , 频率因子A 为5. 714×1010, 各温度T 与速率常数K 的相互关系表达式为:K =5. 714×1010e
参考文献:
[1]刘振海. 分析化学手册·第六分册(热分析) [M ]. 北
-14085/T
。
醋酸溶液0. 2m l , 高氯酸0. 8ml , 于60℃恒温水浴中加热15min , 取出, 流水冷却2min , 加冰醋酸5ml , 摇匀, 随行试剂为空白, 于6010型紫外分光光度计上, 在400~700nm 波长范围内进行扫描。结果供试品溶液与对照品溶液均在552nm 波长处有最大吸收, 故确定测定波长为552nm [2]。
2. 4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液30, 60, 90, 120, 150μl , 分别加入5支干燥具塞试管中, 水浴挥干溶剂, 各加入新鲜配制的50ml /L 香草醛-冰醋酸溶液0. 2m l 、高氯酸0. 8ml , 于60℃恒温水浴中加热15min , 取出, 流水冷却2min , 加冰醋酸5ml , 摇匀, 随行试剂空白, 按照分光光度法试验, 在552nm 波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标, 人参皂苷Re 含量为横坐标, 绘制标准曲线, 线性方程为:y =0. 0573x -0. 0141, r =0. 9997。结果表明:人参皂苷Re 在15. 0~75. 0μg 范围内线性关系良好。
2. 5 精密度试验 精密吸取对照品溶液60μl , 5份, 依法显色后测定吸收度, 结果RSD 为1. 16%,说明精密度良好。
2. 6 样品溶液稳定性和显色后溶液稳定性试验 取样品溶液放置, 分别在0, 1, 2, 3, 4h 取样20μl , 按照线性实验方法显色后测定吸收度, 计算样品含量, 结果4h 内很稳定, RSD 为2. 01%。取样品溶液20μl , 依法显色后放置, 分别在0, 1, 2, 3h 测定吸收度, 计算样品含量, 结果3h 内较稳定, RSD 为2. 39%。
2. 7 重复性试验 依法对同一样品进行6次独立测定吸收度, 结果平均含量为3. 76%,RSD 为1. 87%。
2. 8 加样回收率试验 精密称取已知含量的人参粉末(过65目筛) 1g , 6份, 加入人参皂苷Re 对照品适量, 按照供试品溶液制备方法制备样品液, 各取10μl 样品液, 依法显色后测定吸收度, 计算回收率,
结果见表1。
表1 加样回收率
试验号1
23456
样品量加样量测得量回收率平均RSD (mg ) (mg ) (mg ) (%) 回收率(%)
3. 713. 797. 59102. 373. 783. 815. 5799. 483. 803. 833. 853. 79
3. 84
3. 823. 833. 85
7. 63
7. 607. 767. 69
99. 74
98. 69102. 09101. 30
100. 61 1. 51
2. 9 样品含量测定 精密称取人参粉末(过65目筛) 1g , 按供试品溶液制备方法制备样品溶液, 按线性实验方法显色后测定吸收度, 计算含量, 结果见表
2。
表2 样品含量
试验号123
人参皂苷(mg /g ) 37. 9139. 0338. 20
RSD
(%) 1. 350. 981. 20
3 讨论
采用大孔吸附树脂分离纯化人参有效部位———人参总皂苷, 然后用比色法测定人参总皂苷, 可
以消除杂质干扰。该方法精密度高, 重现性、稳定性均较好, 平均回收率为100. 61%,可以用于人参药材及含人参制剂的质量控制。
参考文献:
[1]郑虎占, 董泽宏, 佘靖. 中药现代化研究与应用[M ]. 北京:学苑出版社, 1997. 43~44.
[2]中华人民共和国卫生部药典委员会. 药品标准(中药成方制剂) (第18册) [S ]. 1998. 167~168.
[3]蔡雄, 刘中秋, 王培训, 等. 大孔吸附树脂富集纯化人参皂苷工艺[J ]. 中成药, 2001, 23(9) :631~634.
(收稿日期:2003-03-31)
[3]
Determination of Ginsenosides in Panax Ginseng by Colorimetric Method
GUI Shuang -ying , ZHOU Y a -qiu
(Anhui College of Traditional Chinese Medicine , Anhui Hefei 230038, China )
A bstract :Objective :To establish a method of determination of ginsenosides in Panax Ginseng . M ethod :
Colo rimetric method analysis was employed . Result :The method w as linear at the range of 15. 0~75. 0μg , r =0. 9997; and the average recovery was 100. 61%,RSD was 1. 51%(n =6) . Conclusion :The method is simple , accurate , hig hly sensitive and reproducible . It m ay be used for the quantitative determination of ginsenosides in Panax Ginseng and its preparations .
Key words :Panax Ginseng ; Ginsenoside Re ; Ginsenosides ; Macropo rous resin ; Colo rimetric method ; Content determination