自噬常见研究方法

电镜:

但是电镜并不足以说明分子水平的机制

WB:

这类WB,经常会±自噬抑制剂来进行实验,看看是不是与自噬有关。

当然,就算是LC3 I和LC3 II,看上去结果也是比较单薄的,于是就诞生了GFP-Atg8/LC3,用融合的GFP被降解下来,说明自噬的形成:

同样,也有用荧光电镜来检测的:

这种降解GFP的方法可以验证自噬,但其实更直接的方法,就是直接给自噬体加上荧光,然后用confocal来进行验证:

流式也能说明自噬体形成的问题:

除了自噬本身的标记蛋白LC3或者Atg以外,还有很多自噬底物的检测,比如SQSTM1这样的蛋白:

自噬被抑制后,这个蛋白就开始累积了。它也叫P62。

MTOR, AMPK,Atg1/ULK1的激酶活性也是检测自噬的常见桥段:

常见的内源性的WIPI检测,但这个价钱就比较高了:

电镜:

但是电镜并不足以说明分子水平的机制

WB:

这类WB,经常会±自噬抑制剂来进行实验,看看是不是与自噬有关。

当然,就算是LC3 I和LC3 II,看上去结果也是比较单薄的,于是就诞生了GFP-Atg8/LC3,用融合的GFP被降解下来,说明自噬的形成:

同样,也有用荧光电镜来检测的:

这种降解GFP的方法可以验证自噬,但其实更直接的方法,就是直接给自噬体加上荧光,然后用confocal来进行验证:

流式也能说明自噬体形成的问题:

除了自噬本身的标记蛋白LC3或者Atg以外,还有很多自噬底物的检测,比如SQSTM1这样的蛋白:

自噬被抑制后,这个蛋白就开始累积了。它也叫P62。

MTOR, AMPK,Atg1/ULK1的激酶活性也是检测自噬的常见桥段:

常见的内源性的WIPI检测,但这个价钱就比较高了:


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