浙江中医药大学学报２０１０年５月第３４卷第５期
苦瓜多糖的提取与含量测定
侯敏芳１
方剑文２
１．浙江省宁波市医疗中心李惠利医院宁波３１５０４０２．浙江中医药大学药学院
摘要：以水提醇沉法从苦瓜中提取得到苦瓜多糖，采用苯酚一硫酸法测定其多糖含量，以正交实验优化显色条件。确定５％苯酚
用量１．０ｍｌ，浓硫酸用量７．０ｍｌ，反应时间３０ｍｉｎ。标准曲线回归方程为Ａ＝０．０４３．２Ｃ一０．００５９，ｒ一０．９９９１（”２６），在２．５～３０．０ｍｇ／Ｌ范围内呈良好线性关系。平均回收率为９７．２％，ＲＳＤ＝１．７１％（ｎ一５）。测得多糖平均含量为２８．６％，ＲＳＤ＝
１．８４％（行一６）。该法简单、准确、稳定，可为其继续研究开发及应用提供参考依据。关键词：苦瓜；多糖；提取；苯酚一硫酸法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４文献标识码：Ｂ文章编号：１００５—５５０９（２０１０）０５—０７６７—０２
苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ
Ｃｈａｒａｎｔｉａ
Ｌ．）又名凉瓜、癫
Ｌ
０ｍｌ，置１０ｍｌ容量瓶中，加人５％苯酚溶液１．０
瓜、癫葡萄、锦荔枝等，是葫芦科苦瓜属植物的果实。它具有良好的食用价值和明显的药用功能，素有“药用蔬菜”之称。现代药理学研究表明，苦瓜有消暑解热、明目解毒、舒张血管、抗心率失常、抗癌、增强机体免疫力等作用。《中国药典））２００５年版Ｉ部等有关资料，均未对苦瓜多糖进行定量检验。本文研究了苯酚一硫酸法测定苦瓜多糖含量的方法，以正交设计优化显色条件，对开发、利用苦瓜资源具有一定的参考价值。１仪器与试药
（１）仪器：ＵＶ一２４０１ＰＣ紫外一可见分光光度计（日本岛津）；ＲＥ一５２ＡＡ型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；８００型离心沉淀器（上海手术器械厂）；ＫＷ一２００Ｂ型高速药物粉碎机（山东青州市精诚机械有限公司）。（２）试药苦瓜药材（购于浙江浙江中医药大学实验药厂），乙醇、硫酸、氯仿、正丁醇、乙醚、丙酮等试剂均为分析纯，苯酚（ＡＲ．重蒸后使用），实验用水为蒸馏水。
２方法
２．１
ｍｌ，混匀，冰浴下再加入７．０ｍｌ浓硫酸，混匀后室温下放置３０ｍｉｎ，以蒸馏水补至刻度，混匀。以蒸馏水替代多糖溶液如上法配制空白，在３００～６００ｎｍ范围内扫描，确定最大吸收波长。确定最大吸收波长
为５２４ｎｍ。（２）显色条件的选择：以显色剂５％苯酚
用量、浓硫酸用量和反应间作为考察因素，采用正交设计Ｌ９（３３）优选最佳色条件，因素与水平见表ｌ。结果见表２，可知，浓酸用量是影响显色条件的最主要因素，显色剂用的影响次之，反应时间的影响相对较小。最佳显条件为Ａ２８３Ｃ２，即５％苯酚１．０ｍｌ，
浓硫酸７．５ｍｌ，反应时间３０ｍｉｒ／。（３）标准曲线的制
备：精密称取无水葡萄糖纯品６２．５ｍｇ，定容２５０
０，１．２
ｍｌ
容量瓶中，分别吸取０．１，０．２，０．４，０．６，０．８，１．
ｍｌ，按“最大吸收波长的选择”项下方法作，
在最优的显色条件下分别测定吸光度。以葡糖浓度（ｍｇ／Ｌ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制线，进行线性回归。得标准曲线的回归方程为Ａ一０．０４３．２Ｃ一
０．００５９，ｒ＝０．９９９
１（ｎ一６），在２．５～３０．０ｍｇ／Ｌ
范围内呈良好线性关系。（４）样品的测定：精密称取
取干燥的苦瓜粉末１０ｇ，加入
同一苦瓜多糖样品６份各约４ｍｇ，容于１０ｍｌ容量瓶，取１．０ｍｌ，按照制备标准曲的步骤测定其吸光度。根据回归方程计算多糖量（校正因子为０．９［１］）。求得多糖平均含量２９．４％。ＲＳＤ一１．８４％，表明本法测定苦瓜多糖复性好。（５）精密度实验：取同一份苦瓜多糖溶液，按上述实验确定的件分析样品，同时平行测定６瓶，ＲＳＤ一１．１３％，见该法测定苦瓜多糖含量的精密度良好。（６）稳定性实验：为了考察苦瓜多糖的显色稳定性，对同一样每隔５ｍｉｎ作一次测定，共测１２次。ＲＳＤ一１．０７％，本法对苦瓜多糖显色至少在１ｈ内稳定。（７）回收率实验：采用加样回收率法，取苦瓜多糖溶液０．１ｍＬ份，分别添加已知含量的葡萄糖对照品溶液，测多糖含量。求得平均回收率为９７．２％，ＲＳＤ一１．７１％。
７６７
多糖的提取
８０％乙醇１００ｍｌ，加热回流２次，每次１ｈ，弃提取液。滤渣挥去乙醇后，用４０倍水分三次回流提取。分别提取１．５
ｈ、０．５ｈ、０．５
ｈ，合并滤液，浓缩。浓
缩液中加入乙醇至含醇量达到８０％，边加边搅拌，得灰白色沉淀。静置１２ｈ后离心分离沉淀，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙醇液澄清无色为止。沉淀以少许蒸馏水溶解，加入等体积的体积比４：１的氯仿／正丁醇混合液，振荡２０ｍｉｎ，静置，取上清液重复以上操作３次去除蛋白。收集清液，再加入４倍乙醇醇析，取沉淀用乙醚、丙酮反复洗涤，干燥，即可得苦瓜粗多糖固体。２．２含量测定
（１）最大吸收波长的选择：最大吸
收波长的选择精密吸取２２５．１ｍｇ／Ｌ苦瓜多糖溶液
浙江中医药大学学报２０１０年５月第３４卷第５期
大荆山银花和山东金银花的含量比较
泮玉华１詹敏２
１．浙江省乐清市中医院温州
３２５６００
２．浙江天目山国家级自然保护区管理局
摘要：［目的］通过高效液相色谱法测定大荆山银花和山东金银花绿原酸和木樨草苷的含量情况，进行药用价值的比较。［方法］绿原酸通过岛津液相色谱仪（ＳＰＤｌ０ＡＶＰ）用２００５年药典规定方法对大荆产山银花及山东金银花进行含量测定；木樨草苷通过。Ａｇｉｌｅｎｔ（安捷伦）１２００用２００５年药典规定方法对两样品进行含量测定。［结果］大荆山银花绿原酸２．３９０％，木樨草苷１．０３０％山东金银花绿原酸３．２２８％，木樨草苷１．０３０％。［结论］大荆产山银花及山金银花均符合药典规定。关键词：银花；绿原酸；木樨草苷；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ２８５文献标识码：Ａ文章编号：１００５—５５０９（２０１０）０５—０７６８—０２
浙江乐清，金银花习用当地产的大荆山银花。浙江乐清大荆山区有许多农民栽种山银花，供当地医院及药店使用。其来源与性状较山东金银花有较大区别。山东金银花为忍冬科植物忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａ—
ｐｏｎｉｃａ
ｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ的干燥花蕾，由胡庆余堂提供。样品
２：大荆山银花（生产批号：２００９０６０２）为忍冬科植物灰毡毛忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓＨａｎｄ．一Ｍａｚｚ
的干燥初开的花，由乐清中医院提供。样品１及样品２粉碎，过四号筛，备用。
２方法与结果［２］
２．１
Ｔｈｕｎｂ的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开
ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓ
放前采收，干燥。当地山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ的干燥花
蕾或带初开的花【１］。二者价格也相差较大，当地大荆产山银花比山东金银花价格低廉。现在以大荆当地山银花及山东金银花为样品，对二者的绿原酸及木樨草苷的含量进行比较。１仪器与材料
色谱条件与适应性试验绿原酸：用十八烷基
键合硅胶为填充剂；乙腈一ｏ．４％磷酸溶液（１３：８７）为流动相；检测波长为３２７ｎｍ。理论塔板数按绿原酸计算，应不得低于１０００。木樨草苷：用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Ａ；以０．５％冰醋酸溶液为Ｂ，按下表进行梯度洗脱；检测波长为３５０ｎｍ。理论塔板数按木犀草苷峰计算，应不低于
２０００。
表１样品流动相测定（％）
（１）仪器：绿原酸：岛津液相色谱仪（ＳＰｎ
１０ＡＶＰ）；木犀草苷：Ａｇｉｌｅｎｔ（安捷伦）１２００。（２）标准品：绿原酸标准品（批号：１１０７５３—２００４１３）、木樨草苷标准品（批号：１１１７２０—２００６０４）均由中国药品生物制品检定所提供。（３）供试品：样品１：山东金银花（生产批号：２００９０５１２），为忍冬科植物忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
表ｌ正交因素水平
３讨论
多糖含量的测定至今大多采用Ｄｕｂｏｉｓ等提出的苯酚一硫酸比色法［１］，其原理是多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，此糠醛衍生物与苯酚缩合生成有色化合物。本文以正交设计Ｌ９（３３）优化显色条件，确定了苯酚一硫酸法测定苦瓜多糖含量的最佳条件。样品经提取、显色后，采用
实验号
１Ｚ３４５６ＫＫＫＲ
Ａ１ｌ１２３２
Ｏ
Ｂ１２３１２３０．５３Ｏ．４７Ｏ．８１
Ｃ一１２３１１２
ＯＯＯ
一
吸光度
Ｏ．４４
分光光度法，在４７３ｎｍ处测定其含量。结果表明：该方法简便可靠，可为苦瓜资源的开发及应用提供相关参考依据。
参考文献：
Ｏ．６３Ｏ．７６Ｏ．６６Ｏ．３６Ｏ．３９
Ｅ１］董群，郑丽伊，方积年．改良的苯酚一硫酸法测定多糖和
寡糖含量的研究［Ｊ］．中国药学杂志，１９９６；３１（９）：５５０—
５５３．
Ｏ
Ｏ
（收稿日期
的“铊“
２０１０．０１—２６）
Ｏ铊他ｎ孙Ｏ．３５Ｏ
７６８
浙江中医药大学学报２０１０年５月第３４卷第５期
苦瓜多糖的提取与含量测定
侯敏芳１
方剑文２
１．浙江省宁波市医疗中心李惠利医院宁波３１５０４０２．浙江中医药大学药学院
摘要：以水提醇沉法从苦瓜中提取得到苦瓜多糖，采用苯酚一硫酸法测定其多糖含量，以正交实验优化显色条件。确定５％苯酚
用量１．０ｍｌ，浓硫酸用量７．０ｍｌ，反应时间３０ｍｉｎ。标准曲线回归方程为Ａ＝０．０４３．２Ｃ一０．００５９，ｒ一０．９９９１（”２６），在２．５～３０．０ｍｇ／Ｌ范围内呈良好线性关系。平均回收率为９７．２％，ＲＳＤ＝１．７１％（ｎ一５）。测得多糖平均含量为２８．６％，ＲＳＤ＝
１．８４％（行一６）。该法简单、准确、稳定，可为其继续研究开发及应用提供参考依据。关键词：苦瓜；多糖；提取；苯酚一硫酸法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４文献标识码：Ｂ文章编号：１００５—５５０９（２０１０）０５—０７６７—０２
苦瓜（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ
Ｃｈａｒａｎｔｉａ
Ｌ．）又名凉瓜、癫
Ｌ
０ｍｌ，置１０ｍｌ容量瓶中，加人５％苯酚溶液１．０
瓜、癫葡萄、锦荔枝等，是葫芦科苦瓜属植物的果实。它具有良好的食用价值和明显的药用功能，素有“药用蔬菜”之称。现代药理学研究表明，苦瓜有消暑解热、明目解毒、舒张血管、抗心率失常、抗癌、增强机体免疫力等作用。《中国药典））２００５年版Ｉ部等有关资料，均未对苦瓜多糖进行定量检验。本文研究了苯酚一硫酸法测定苦瓜多糖含量的方法，以正交设计优化显色条件，对开发、利用苦瓜资源具有一定的参考价值。１仪器与试药
（１）仪器：ＵＶ一２４０１ＰＣ紫外一可见分光光度计（日本岛津）；ＲＥ一５２ＡＡ型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；８００型离心沉淀器（上海手术器械厂）；ＫＷ一２００Ｂ型高速药物粉碎机（山东青州市精诚机械有限公司）。（２）试药苦瓜药材（购于浙江浙江中医药大学实验药厂），乙醇、硫酸、氯仿、正丁醇、乙醚、丙酮等试剂均为分析纯，苯酚（ＡＲ．重蒸后使用），实验用水为蒸馏水。
２方法
２．１
ｍｌ，混匀，冰浴下再加入７．０ｍｌ浓硫酸，混匀后室温下放置３０ｍｉｎ，以蒸馏水补至刻度，混匀。以蒸馏水替代多糖溶液如上法配制空白，在３００～６００ｎｍ范围内扫描，确定最大吸收波长。确定最大吸收波长
为５２４ｎｍ。（２）显色条件的选择：以显色剂５％苯酚
用量、浓硫酸用量和反应间作为考察因素，采用正交设计Ｌ９（３３）优选最佳色条件，因素与水平见表ｌ。结果见表２，可知，浓酸用量是影响显色条件的最主要因素，显色剂用的影响次之，反应时间的影响相对较小。最佳显条件为Ａ２８３Ｃ２，即５％苯酚１．０ｍｌ，
浓硫酸７．５ｍｌ，反应时间３０ｍｉｒ／。（３）标准曲线的制
备：精密称取无水葡萄糖纯品６２．５ｍｇ，定容２５０
０，１．２
ｍｌ
容量瓶中，分别吸取０．１，０．２，０．４，０．６，０．８，１．
ｍｌ，按“最大吸收波长的选择”项下方法作，
在最优的显色条件下分别测定吸光度。以葡糖浓度（ｍｇ／Ｌ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制线，进行线性回归。得标准曲线的回归方程为Ａ一０．０４３．２Ｃ一
０．００５９，ｒ＝０．９９９
１（ｎ一６），在２．５～３０．０ｍｇ／Ｌ
范围内呈良好线性关系。（４）样品的测定：精密称取
取干燥的苦瓜粉末１０ｇ，加入
同一苦瓜多糖样品６份各约４ｍｇ，容于１０ｍｌ容量瓶，取１．０ｍｌ，按照制备标准曲的步骤测定其吸光度。根据回归方程计算多糖量（校正因子为０．９［１］）。求得多糖平均含量２９．４％。ＲＳＤ一１．８４％，表明本法测定苦瓜多糖复性好。（５）精密度实验：取同一份苦瓜多糖溶液，按上述实验确定的件分析样品，同时平行测定６瓶，ＲＳＤ一１．１３％，见该法测定苦瓜多糖含量的精密度良好。（６）稳定性实验：为了考察苦瓜多糖的显色稳定性，对同一样每隔５ｍｉｎ作一次测定，共测１２次。ＲＳＤ一１．０７％，本法对苦瓜多糖显色至少在１ｈ内稳定。（７）回收率实验：采用加样回收率法，取苦瓜多糖溶液０．１ｍＬ份，分别添加已知含量的葡萄糖对照品溶液，测多糖含量。求得平均回收率为９７．２％，ＲＳＤ一１．７１％。
７６７
多糖的提取
８０％乙醇１００ｍｌ，加热回流２次，每次１ｈ，弃提取液。滤渣挥去乙醇后，用４０倍水分三次回流提取。分别提取１．５
ｈ、０．５ｈ、０．５
ｈ，合并滤液，浓缩。浓
缩液中加入乙醇至含醇量达到８０％，边加边搅拌，得灰白色沉淀。静置１２ｈ后离心分离沉淀，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙醇液澄清无色为止。沉淀以少许蒸馏水溶解，加入等体积的体积比４：１的氯仿／正丁醇混合液，振荡２０ｍｉｎ，静置，取上清液重复以上操作３次去除蛋白。收集清液，再加入４倍乙醇醇析，取沉淀用乙醚、丙酮反复洗涤，干燥，即可得苦瓜粗多糖固体。２．２含量测定
（１）最大吸收波长的选择：最大吸
收波长的选择精密吸取２２５．１ｍｇ／Ｌ苦瓜多糖溶液
浙江中医药大学学报２０１０年５月第３４卷第５期
大荆山银花和山东金银花的含量比较
泮玉华１詹敏２
１．浙江省乐清市中医院温州
３２５６００
２．浙江天目山国家级自然保护区管理局
摘要：［目的］通过高效液相色谱法测定大荆山银花和山东金银花绿原酸和木樨草苷的含量情况，进行药用价值的比较。［方法］绿原酸通过岛津液相色谱仪（ＳＰＤｌ０ＡＶＰ）用２００５年药典规定方法对大荆产山银花及山东金银花进行含量测定；木樨草苷通过。Ａｇｉｌｅｎｔ（安捷伦）１２００用２００５年药典规定方法对两样品进行含量测定。［结果］大荆山银花绿原酸２．３９０％，木樨草苷１．０３０％山东金银花绿原酸３．２２８％，木樨草苷１．０３０％。［结论］大荆产山银花及山金银花均符合药典规定。关键词：银花；绿原酸；木樨草苷；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ２８５文献标识码：Ａ文章编号：１００５—５５０９（２０１０）０５—０７６８—０２
浙江乐清，金银花习用当地产的大荆山银花。浙江乐清大荆山区有许多农民栽种山银花，供当地医院及药店使用。其来源与性状较山东金银花有较大区别。山东金银花为忍冬科植物忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａｊａ—
ｐｏｎｉｃａ
ｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ的干燥花蕾，由胡庆余堂提供。样品
２：大荆山银花（生产批号：２００９０６０２）为忍冬科植物灰毡毛忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓＨａｎｄ．一Ｍａｚｚ
的干燥初开的花，由乐清中医院提供。样品１及样品２粉碎，过四号筛，备用。
２方法与结果［２］
２．１
Ｔｈｕｎｂ的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开
ｍａｃｒａｎｔｈｏｉｄｅｓ
放前采收，干燥。当地山银花为忍冬科植物灰毡毛忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ的干燥花
蕾或带初开的花【１］。二者价格也相差较大，当地大荆产山银花比山东金银花价格低廉。现在以大荆当地山银花及山东金银花为样品，对二者的绿原酸及木樨草苷的含量进行比较。１仪器与材料
色谱条件与适应性试验绿原酸：用十八烷基
键合硅胶为填充剂；乙腈一ｏ．４％磷酸溶液（１３：８７）为流动相；检测波长为３２７ｎｍ。理论塔板数按绿原酸计算，应不得低于１０００。木樨草苷：用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相Ａ；以０．５％冰醋酸溶液为Ｂ，按下表进行梯度洗脱；检测波长为３５０ｎｍ。理论塔板数按木犀草苷峰计算，应不低于
２０００。
表１样品流动相测定（％）
（１）仪器：绿原酸：岛津液相色谱仪（ＳＰｎ
１０ＡＶＰ）；木犀草苷：Ａｇｉｌｅｎｔ（安捷伦）１２００。（２）标准品：绿原酸标准品（批号：１１０７５３—２００４１３）、木樨草苷标准品（批号：１１１７２０—２００６０４）均由中国药品生物制品检定所提供。（３）供试品：样品１：山东金银花（生产批号：２００９０５１２），为忍冬科植物忍冬Ｌｏｎｉｃｅｒａ
表ｌ正交因素水平
３讨论
多糖含量的测定至今大多采用Ｄｕｂｏｉｓ等提出的苯酚一硫酸比色法［１］，其原理是多糖在浓硫酸的作用下水解成单糖，并迅速脱水成糠醛衍生物，此糠醛衍生物与苯酚缩合生成有色化合物。本文以正交设计Ｌ９（３３）优化显色条件，确定了苯酚一硫酸法测定苦瓜多糖含量的最佳条件。样品经提取、显色后，采用
实验号
１Ｚ３４５６ＫＫＫＲ
Ａ１ｌ１２３２
Ｏ
Ｂ１２３１２３０．５３Ｏ．４７Ｏ．８１
Ｃ一１２３１１２
ＯＯＯ
一
吸光度
Ｏ．４４
分光光度法，在４７３ｎｍ处测定其含量。结果表明：该方法简便可靠，可为苦瓜资源的开发及应用提供相关参考依据。
参考文献：
Ｏ．６３Ｏ．７６Ｏ．６６Ｏ．３６Ｏ．３９
Ｅ１］董群，郑丽伊，方积年．改良的苯酚一硫酸法测定多糖和
寡糖含量的研究［Ｊ］．中国药学杂志，１９９６；３１（９）：５５０—
５５３．
Ｏ
Ｏ
（收稿日期
的“铊“
２０１０．０１—２６）
Ｏ铊他ｎ孙Ｏ．３５Ｏ
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